> Des bandelettes de membrane coatées en lignes fines parallèles avec plusieurs antigènes purifiés, biochimiquement caractérisés, sont utilisées comme phase solide. Les membranes sont ensuite fixées comme des BIOCHIPs sur des lames.

> Si l'échantillon est positif, les anticorps spécifiques dans l'échantillon de sérum dilué se lient aux antigènes couplés à la phase solide.

> Dans une seconde étape, les anticorps liés sont détectés avec des anticorps anti-immunoglobulines humaines couplés à la phosphatase alcaline (PAL).

> Dans une troisième étape, les anticorps liés sont rendus visibles en utilisant une solution chromogène/substrat capable de générer une réaction colorée. Une bande sombre intense apparaît au niveau de la ligne de l'antigène correspondant si l'échantillon de sérum contient les anticorps spécifiques.

> Les lames sont incubées en utilisant la technique TITERPLANE : les échantillons et les réactifs sont déposés dans les aires de réaction du support de lame. Les lames sont ensuite placées sur le support de réaction, où toutes les bandelettes sont en contact avec les liquides, et les réactions individuelles commencent simultanément.

> Selon le spectre d'antigènes utilisé, il est possible d'analyser plusieurs anticorps les uns à côté des autres et simultanément dans les mêmes conditions.

> Les bandelettes de dot sont collées dans chacun des puits d'une lame (1, 3 ou 5 puits).

> La durée totale du test est d'environ 100 minutes. L'un des avantages de ce mode opératoire est que durant l'étape de lavage, les réactifs de l'étape suivante peuvent être déposés sur le support de réaction.

> Les échantillons ou les réactifs sont déposés sur un support de réactif. L'incubation est initiée lorsque la lame est posée à l'envers sur le support de réactif (TITERPLANE, cf. technique page précédente).

>Analyse simultanée du nombre d'échantillons souhaité.

> Consommation de réactifs faible.

> Réactifs prêts à l'emploi (tampon de lavage : concentré).

> Toutes les incubations se font à température ambiante. L'agitation du support de réaction avec les lames augmente la sensibilité du test.

Anti-ENA profil Plus

Détection d'anticorps anti-ENA, exemple de 5 patients sur une même lame

> Les résultats sont évalués visuellement, aucun appareil supplémentaire n'est nécessaire. Antigènes coatés en bandes parallèles à des places définies.

> Une bande de contrôle dans chaque puits indique une réalisation correcte du test.

> Différenciation nette entre les résultats positifs et négatifs. L'intensité de coloration de la bande antigénique est en corrélation avec le titre en anticorps.

> Les antigènes utilisés sont hautement purifiés, généralement par chromatographie d'affinité. Les bandelettes de membrane ne contiennent aucune protéine superflue susceptible de produire des résultats positifs non spécifiques.

> Les lames incubées peuvent être conservées longtemps. Les résultats peuvent être facilement documentés.

EUROASSAY Anti-ENA Profil Plus

Exemple : détection des anticorps anti-SS-A and anti-SS-B dans le cas de Syndrome de Sjögren